Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中随之扩展

从第一次显现出肝肝细胞自身免疫球蛋白到显现出1改进型肝炎医学征状的的转变率在成年人中后期就有极佳的阐述，多个肝肝细胞自身免疫球蛋白特征性的成年人中会有70%在血液转换后10年中患上肝炎，而随访15年的成年人这一分之一减低到84%。相较之下，占医学1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的发作机制还没有想得到适当的研究成果。

越来越多的人开始采用分期该系统来下定义1改进型肝炎的的转变：母体在显现出多种肝肝细胞自身免疫球蛋白时转回第1过渡期，显现出高血压异常时转回第2过渡期，显现出征状时转回第3过渡期。一些多发肝肝细胞自身免疫球蛋白特征性的母体，在1期和2期，的转变快，并转变为发作的1改进型肝炎。我们之前阐述了一第三组在首次扫描到多种肝肝细胞自身免疫球蛋白试样后至多于10年无肝炎的极快的转变者，这第三组征状人数多于，但特点非常说明。随后，我们发现肝肝细胞自身抗原酪氨酸CD8+T肝细胞反应在的转变较快的征状中会基本不假定，但在近期发作和长年假定的肝炎征状中会很容易扫描到。这可能表明，与的转变征状相较，这些征状自身抗体的抑制进一步提高。

早期研究成果表明，尽管抑制性T肝细胞(Treg)数量正常，但肝炎征状假定一些机制缺陷，其中会包括对IL-2的反应能力增加。此外，肝炎征状中会的现象CD4+T肝细胞可能对抑制更为重要抵抗性，表现为现象T肝细胞的抑制作用减弱，自然导致的Treg和体外导致的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞中会IL-2反应减弱。本研究成果的目的是阐述了CD4+抑制性T肝细胞(Treg)在群集极较快的转变者中会的特点，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以成年人为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的征状亲属中会安全检查1改进型肝炎的危险因素。我们之前阐述了长年较快的转变者的特点，他们保持良好多重肝肝细胞自身免疫球蛋白特征性超过10年，但没有显现出肝炎的医学征状，快性或非透过性自身免疫。随后，10名在此之后保持良好无肝炎并愿意给予大量血液试样的较快的转变者纳入T和B肝细胞机制分析。在现在的研究成果中会，8名快的转变者(SP第三组)，中会位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝肝细胞自身免疫球蛋白特征性。所有的参加者都处于1改进型肝炎的转变的1期，尽管一些人随后失去了肝肝细胞自身免疫球蛋白对某些抗原的特征性反应，然而，一名征状仍未处于2期至多于6年，但没有显现出医学征状，一名征状被诊断为肝炎，该成年人72岁，在通过观察试验中试样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中会对该NAD透过了单独检验。分离出来外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞练成和T肝细胞抑制作用试验检验NAD中会Treg的Hz、表改进型和机制。采用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、并不一定和紧接著)透过无统筹聚类分析，检验Treg表改进型。

结果：与健康NAD相较，来自快的转变体的无意识CD4+T肝细胞的统筹聚类揭示，酪氨酸的无意识CD4+ TregHz减低，与持续性可借的TNFR相关蛋白(GITR)表示减低有关。一名HbA1c下降时的征状与的转变较快者和匹配的相符合第三组相较，Treg对光不尽相同。机制相相当，与健康NAD相较，来自较快的转变体的Treg介导的CD4+现象T肝细胞抑制作用值得注意受损。表现为对现象CD4+T肝细胞CD25和CD134表示的抑制作用减低。

布1 深入的表改进型分析揭示，CD4+Treg亚改进型在快的转变路由表中会减低。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有NAD的活命CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标明物表示核对出10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)采用9个并不相同Treg标明填充的10个元簇的MST。每个数据流代表一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在数据流第三组周围绘图。每个数据流中会的饼布坚称单个标明的表示档次。(b)每个元聚类的热布，以揭示结构上标明表示。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充布，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较之下稀土元素为每个metacluster罐两条路线布(稀土元素> 0.05%)相符为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。浅橙色左上角代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩核对。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 采用CITRUS的预测模改进型证实，TregHz的减低是的转变较快的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)相当SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的特色布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示透过分离出来，模拟FlowSOM社群。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)第三组以及NADSP 606(浅橙色)中会CD25+ cd127的Hz核心内容布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的罐两条路线布;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)玉米簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头突出的簇被辨认为SP和HD路由表之间的并不相同。(j)罐两条路线布揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相较之下稀土元素(分之一)。(k)直方布揭示每个簇的表改进型(紫色)和Treg标明相较之下表示与氛围表示(橙色);上列，寄存器Treg_3;下面恰巧，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇中会标明的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩核对

布3 与健康献血者相较，的转变较快者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表示标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表示热布(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(浅橙色)的FlowSOM GITR表示组合成，揭示直方布(c)和核心内容布(d)。Wilcoxon类推符号秩和核对，p< 0.07(浅橙色)所有NAD包括，p< 0.05(橙色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(浅橙色)组合成，揭示直方布(e)和核心内容布(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩核对

布4 来自较快的转变的CD4+ treg肝细胞控制现象CD4+T肝细胞的能力增加。SP第三组用橙色的两条路线和左上角坚称，HD第三组用黑色的两条路线和左上角坚称，浅橙色的两条路线/左上角坚称NADsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标明为CFSE, Treg按观察的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化肝细胞，培训3同一天透过流式肝细胞练成扫描。(a-d)与CD4+这样的话者相较之下应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。采用特征性相符合(酪氨酸的拥护肝细胞不含treg)计算抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

布5 现象CD4+T肝细胞对较快的转变的T肝细胞活命化的抑制作用更尖锐。SP第三组用橙色的两条路线和左上角坚称，HD第三组用黑色的两条路线和左上角坚称，浅橙色的两条路线/左上角坚称NADsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标明，treg按观察的分之一氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活命化肝细胞，培训3同一天透过流式肝细胞练成(CD25反染)和肝巨噬细胞分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用花红(b)。(c,d) CD25抑制作用花红(c)和CD134抑制作用花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中会的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

推论：我们得出推论的推论是，来自较快的转变子的活命化无意识CD4+Treg在GITR表示中会想得到了扩展和丰富，凸显了进一步研究成果Treg在1改进型肝炎风险母体中会的异质性的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28